1. <tbody id="brm9n"><noscript id="brm9n"></noscript></tbody>
      <progress id="brm9n"></progress>

    2. <dd id="brm9n"><track id="brm9n"></track></dd>
    3. <dd id="brm9n"><track id="brm9n"><video id="brm9n"></video></track></dd>
      <rp id="brm9n"><ruby id="brm9n"></ruby></rp>

    4. 股票代码:838645

      400-043-8177

      中文  EN

      畜用疫苗

      LIVESTOCK VACCINE

      畜用疫苗 禽用疫苗 宠物疫苗 经济动物疫苗

      非瘟试剂盒

      发布时间:2019-07-26 信息来源:

      非瘟中盒5副本.png


      非洲猪瘟病毒荧光定量PCR快速检测试剂盒说明书

      【兽药名称】

      ? 通用名:非洲猪瘟病毒荧光定量PCR快速检测试剂盒

      ? 商品名: 无

      ? 英文名:African swine Fever Virus (ASFV) PCR Fluorescence Fast Detection Kit

      【用途】

      ? 本试剂盒适用于检测病料核酸中的非洲猪瘟病毒(ASFV)DNA,检测结果可用于非洲猪瘟病毒感染的辅助诊断。

      【检验原理】

      ? 本试剂盒利用针对非洲猪瘟病毒核酸保守区设计的一对特异性引物、一条特异荧光探针,配以PCR反应液等组分,在荧光定量PCR仪上,应用实时荧光定量PCR检测技术,通过荧光信号的变化实现非洲猪瘟病毒 DNA的快速检测。

      PCR检测体系含有阳性内对照(内标),通过检测内标是否正常来监测待测样本中是否具有PCR抑制物,避免PCR假阴性。

      【主要组成成份】

      序号

      试剂名称

      规格与装量

      主要成分

      1

      ASFV-酶混合液

      100μl/管×1管

      DNA聚合酶和尿嘧啶DNA糖基化酶

      2

      ASFV-内标

      50μl/管×1管

      含内标基因片段的克隆质粒

      3

      ASFV-核酸释放剂

      250μl/管×1

      SDSTE

      4

      ASFV-PCR反应液

      950μl/管×2管

      引物、探针、dNTPs、镁离子、PCR缓冲液

      5

      ASFV-阴性对照

      50μl/管×1管

      灭菌生理盐水

      6

      ASFV-阳性对照

      50μl/管×1管

      含目标序列的克隆质粒

      ? 备注:1)不同批号产品的成分之间不可以混用或互换。

      【适用仪器】

      ? 适用于ABI7500荧光PCR仪、SLAN-96P、SLAN-24P荧光PCR仪等。

      【样本要求】

      ? 1.适用样本类型:血清、血浆、组织匀浆液上清等。

      ? 2.样本保存和运送:长期保存请置于-20℃以下。标本运送采用冰壶加冰或泡沫箱加冰密封进行运输。

      【检验方法】

      ? 1 ?试剂准备(在试剂准备区进行)

      ? 1.1 取出试剂盒中的各组分,室温放置,待其温度平衡至室温,混匀后备用;

      ? 1.2 根据待测样本、阴性对照、阳性对照的数量,按比例(反应液38μl/人份+酶混合液 2.0μl/人份+内标1.0μl/人份)取相应量的反应液、酶混合液及内标,充分混匀成PCR-mix,瞬时离心后备用。

      ? 2 ?样本处理与加样(在样本处理区进行)

      ? 2.1 ?加样

      ? 2.1.1每个PCR反应管中加入核酸释放剂5μl(建议深吸浅打,避免出现气泡),然后分别加入待测样本、阴性对照、阳性对照各5μl,吸打3-5次混匀(轻轻吸打,避免出现气泡);室温静置10分钟以上。

      ? 2.1.2每管加入PCR-mix 40μl,吸打混匀2-3次,盖上管盖(去除气泡后),2000rpm离心30 秒。

      ? 3 ?PCR 扩增(请参照各仪器使用说明书进行设置)

      ? 3.1 将PCR反应管放入扩增仪样品槽,按对应顺序设置阴性对照、阳性对照以及未知样本,并设置样本名称。

      ? 3.2 荧光检测通道选择:

      ? 3.2.1 SLAN 、ABI、Stratagene系列仪器:

      ? 选择FAM通道(Reporter:FAM, Quencher:none)检测ASFV-DNA;2)选择HEX 或VIC通道(Reporter:HEX/VIC, Quencher:none)检测内标;3)参比荧光(Passive Reference)设置为none。设置Sample Volume为50。

      ? 3.3 循环参数设定(SLAN 24等具备12℃升降温的仪器可执行FAST程序):

      步骤

      常规程序

      FAST程序*

      温度

      时间

      循环数

      温度

      时间

      循环数

      1

      UNG 酶反应

      50℃

      2 分钟

      1

      2

      Taq 酶活化

      95℃

      2 分钟

      1

      95℃

      2 分钟

      1

      3

      变性

      95℃

      15

      40

      95℃

      3

      40

      退火,延伸,荧光采集

      60℃

      30

      60℃

      20

      4

      仪器冷却

      25℃

      10

      1

      3.3.1 ABI、Stratagene仪器参数设置(*注:由于ABI7500仪器原因,不能设置为30秒,可以设置为31秒或32秒)

      4. 结果分析(请参照各仪器使用说明书进行设置,以下分析以ABI系列仪器为例)反应结束后自动保存结果,根据分析后图像调节Baseline的Start值、End值以及Threshold值(用户可根据实际情况自行调整,Start值可以在3~15、End值可设在5~20,调整阴性对照的扩增曲线平直或低于阈值线),点击Analyze进行分析,使各项参数符合下述“5. 质量控制”中的要求,然后到Plate窗口下记录Ct值。

      ? 5. 质量控制

      ? 5.1 ASFV-阴性对照:Ct值无显示;但内标检测为阳性,且Ct值≤40。

      ? 5.2 ASFV-阳性对照:Ct值≤35。

      ? 5.3 以上要求需在同一次实验中同时满足,否则,本次实验无效,需重新进行。

      【参考值(参考范围)】

      ? 通过参考值的研究确定本试剂盒检测目标基因的Ct参考值为39,检测内标的Ct参考值为40。

      【检验结果的解释】

      ? 1 ?阴阳性判断:

      ? 1.1 对于测定Ct值≤35的样本,报告为ASFV- DNA阳性;

      ? 1.2 对于测定35≤Ct值<40的样本,报告为ASFV- DNA可疑,需对该样本复测,若Ct值≤40,报告为ASFV- DNA阳性,若Ct值>40,报告为ASFV- DNA低于试剂盒检测下限。

      ? 1.3 对于测定Ct值>40 的样本,同时,内标检测为阳性(Ct值≤40),报告注明ASFV- DNA低于试剂盒检测下限;若内标Ct值> 40或无显示,则该样本的检测结果无效,应查找并排除原因,并对此样本进行重复实验(若重复试验的检测结果仍无效,请与本公司联系)。

      检测方法的局限性】

      ? 样本检测结果与样本收集、处理、运送及保存质量有关,其中任何失误都将会导致结果不准确。如果样本处理时没有控制好交叉污染,可能出现假阳性结果。

      【产品性能指标】

      ? 本试剂盒检测企业工作参考品,阴、阳性符合率均为100%;精密度试验表明批内和批间重复性好,检测结果Ct值的变异系数均<10%,浓度值变异系数均<50%;本试剂盒最低检出量为4.00E+02 copies/mL;

      【注意事项】

      ? 1. 本品仅用于兽医诊断使用,使用前请仔细阅读本说明书。

      ? 2. 试验前请熟悉和掌握需使用的各种仪器的操作方法和注意事项,对每次实验进行质量控制。

      ? 3. 实验室管理应严格按照PCR基因扩增实验室的管理规范,实验人员必须进行专业培训,实验过程严格分区进行,所用消耗品应灭菌后一次性使用,实验操作的每个阶段使用专用的仪器和设备,各区各阶段用品不能交叉使用。

      ? 4. 所有检测样品应视为具有传染性物质,实验过程中穿工作服,戴一次性手套并经常替换手套以避免样品间的交叉污染;样本操作、废弃物处理均需符合相关法规要求:《微生物生物医学实验室生物安全通用准则》和《医疗废物管理条例》。

      ? 5. 所有的试剂在使用前,均需在室温下充分融化、混匀后使用。

      【规格】50反应/盒

      【储存条件及有效期】试剂应避光密闭储存于-20±5℃;试剂盒有效期为12个月,避免反复冻融。

      【生产企业】吉林和元生物工程股份有限公司



      更新时间:2019-07-26

      上一篇:卫必沙

      下一篇:返回列表

      CONTACT 联系我们

      地址:中国吉林·松原市经济技术开发区创业大街1009号
      24小时专家服务热线:400-043-8177
      吉ICP备19001219号

      0431-80542655
      0438-5071333
      尊龙d88娱乐